槍狀肝吸蟲(chóng)PCR檢測(cè)試劑盒說(shuō)明書(shū)組成及試劑配制:
1、 酶標(biāo)板：一塊（96孔）
2、 標(biāo)準(zhǔn)品（凍干品）： 2瓶，請(qǐng)臨用前15分鐘內(nèi)配制。每瓶以樣品稀釋液稀釋至0.5ml，蓋好后室溫靜置大約10分鐘，同時(shí)反復(fù)顛倒/搓動(dòng)以助溶解，其濃度為200 U/L，然后做系列倍比稀釋?zhuān)ㄗⅲ翰灰苯釉诎逯羞M(jìn)行倍比稀釋?zhuān)?，分別配制成200 U/L，100 U/L，50 U/L，25 U/L，12.5 U/L，6.25 U/L，3.12 U/L，樣品稀釋液直接作為空白孔 0 U/L。如配制100 U/L標(biāo)準(zhǔn)品：取0.3ml （不要少于0.3ml ）200 U/L的上述標(biāo)準(zhǔn)品加入含有0.3ml樣品稀釋液的Eppendorf管中，混勻即可，其余濃度以此類(lèi)推。
3、 樣品稀釋液：1×20ml。
槍狀肝吸蟲(chóng)PCR檢測(cè)試劑盒說(shuō)明書(shū)4、 檢測(cè)稀釋液A：1×10ml。
5、 檢測(cè)稀釋液B：1×10ml。

樣本采集、存放及運(yùn)輸：
1、樣本采集：各類(lèi)型樣本按照常規(guī)方法采集；
槍狀肝吸蟲(chóng)PCR檢測(cè)試劑盒說(shuō)明書(shū)2、存放：樣本在2~8℃條件下保存應(yīng)不超過(guò)72h，-70℃以下可保存，但應(yīng)避免反復(fù)凍融（zui多凍融3次）；
3、運(yùn)輸：采用泡沫箱加冰密封進(jìn)行運(yùn)輸。

特點(diǎn)優(yōu)勢(shì)：
    1.特異性：所有產(chǎn)品使用的引物均經(jīng)過(guò)詳盡的生物信息學(xué)分析，經(jīng)過(guò)GenBank及自建龐大數(shù)據(jù)庫(kù)的比對(duì)，確保所用的每一條引物均為種屬或血清型特異的基因序列區(qū)段，可實(shí)現(xiàn)對(duì)細(xì)菌種屬及血清型的特異檢測(cè)，特異性均達(dá)到100%。
    2.   重現(xiàn)性：該系列所有產(chǎn)品均經(jīng)過(guò)大量實(shí)驗(yàn)菌株的驗(yàn)證，重現(xiàn)性為100%。
    3.   靈敏性：該系列產(chǎn)品可實(shí)現(xiàn)對(duì)檢測(cè)菌的高靈敏檢測(cè)，當(dāng)樣品中細(xì)菌的濃度達(dá)到103cfu/ml時(shí)，可實(shí)現(xiàn)對(duì)其的直接檢測(cè)，無(wú)需繁瑣的增菌過(guò)程。
    4.   實(shí)用性：檢測(cè)范圍廣，涵蓋了對(duì)人體危害較為嚴(yán)重的17種呼吸道及腸道致病菌，可實(shí)現(xiàn)對(duì)臨床樣品及其他環(huán)境取樣的快速檢測(cè)，整個(gè)檢測(cè)過(guò)程為3-4個(gè)小時(shí)。
    5.   優(yōu)勢(shì)1：序列資源豐富，除GenBank公布的序列外，公司還進(jìn)行了大量菌株的序列破譯，從理論上保證所選引物具有良好的保守性和特異性。

    6.   優(yōu)勢(shì)2：該系列試劑盒均經(jīng)過(guò)大量的保守性及特異性實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證，憑借公司擁有的豐富的菌種資源，每一種檢測(cè)試劑盒均經(jīng)過(guò)了20余種標(biāo)準(zhǔn)菌株和臨床菌株的保守性驗(yàn)證及40余種近緣標(biāo)準(zhǔn)菌株和臨床菌株的特異性驗(yàn)證，確保在使用過(guò)程中不會(huì)出現(xiàn)任何的假陽(yáng)性及假陰性報(bào)告結(jié)果。

反應(yīng)五要素：
參加PCR反應(yīng)的物質(zhì)主要有五種即引物、酶、dNTP、模板和Mg2+
引物：引物是PCR特異性反應(yīng)的關(guān)鍵，PCR 產(chǎn)物的特異性取決于引物與模板DNA互補(bǔ)的程度。理論上，只要知道任何一段模板DNA序列， 就能按其設(shè)計(jì)互補(bǔ)的寡核苷酸鏈做引物，利用PCR就可將模板DNA在體外大量擴(kuò)增。設(shè)計(jì)引物應(yīng)遵循以下原則：
①引物長(zhǎng)度： 15-30bp，常用為20bp左右。
②引物擴(kuò)增跨度： 以200-500bp為宜，特定條件下可擴(kuò)增長(zhǎng)至10kb的片段。
③引物堿基：G+C含量以40-60%為宜，G+C太少擴(kuò)增效果不佳，G+C過(guò)多易出現(xiàn)非特異條帶。ATGC隨機(jī)分布，避免5個(gè)以上的嘌呤或嘧啶核苷酸的成串排列。
④避免引物內(nèi)部出現(xiàn)二級(jí)結(jié)構(gòu)，避免兩條引物間互補(bǔ)，特別是3'端的互補(bǔ)，否則會(huì)形成引物二聚體，產(chǎn)生非特異的擴(kuò)增條帶。
⑤引物3'端的堿基，特別是末及倒數(shù)第二個(gè)堿基，應(yīng)嚴(yán)格要求配對(duì)，以避免因末端堿基不配對(duì)而導(dǎo)致PCR失敗。
⑥引物中有或能加上合適的酶切位點(diǎn)， 被擴(kuò)增的靶序列有適宜的酶切位點(diǎn)， 這對(duì)酶切分析或分子克隆很有好處。
⑦引物的特異性：引物應(yīng)與核酸序列數(shù)據(jù)庫(kù)的其它序列無(wú)明顯同源性。
引物量：每條引物的濃度0.1～1umol或10～100pmol，以低引物量產(chǎn)生所需要的結(jié)果為好，引物濃度偏高會(huì)引起錯(cuò)配和非特異性擴(kuò)增，且可增加引物之間形成二聚體的機(jī)會(huì)。

干擾素誘導(dǎo)跨膜蛋白1抗體 英文縮寫(xiě)： IFITM1

干擾素誘導(dǎo)蛋白44抗體 英文縮寫(xiě)： IFI44

5-三磷酸肌醇受體3抗體 英文縮寫(xiě)： ITPR3

干擾素omega 1蛋白抗體 英文縮寫(xiě)： IFNW1

干擾素alpha 7蛋白抗體 英文縮寫(xiě)： IFNA7

干擾素β抗體 英文縮寫(xiě)： IFN-Beta

DNA結(jié)合抑制因子1抗體 英文縮寫(xiě)： ID1

γ干擾素誘導(dǎo)蛋白202抗體 英文縮寫(xiě)： IFI-202

腸型脂肪酸結(jié)合蛋白抗體 英文縮寫(xiě)： intestinal FABP/IFABP/FABP2

生長(zhǎng)抑制因子基因1抗體 英文縮寫(xiě)： ING1

白介素8抗體 英文縮寫(xiě)： IL-8/CXCL8

整合素連接激酶-1抗體 英文縮寫(xiě)： ILK-1

磷酸化KB抑制蛋白激酶α抗體 英文縮寫(xiě)： phospho-IKK alpha (Ser176 + Ser180)

磷酸化KB抑制蛋白激酶α/β抗體 英文縮寫(xiě)： Phospho-IKK alpha(Ser180) + IKK beta(Ser181)

磷酸化KB抑制蛋白激酶α/β抗體 英文縮寫(xiě)： Phospho-IKK alpha/beta (Ser176 + Ser180)

細(xì)胞纖毛內(nèi)轉(zhuǎn)運(yùn)同源蛋白46抗體 英文縮寫(xiě)： IFT46

白細(xì)胞介素-10受體a抗體 英文縮寫(xiě)： IL-10RA

白細(xì)胞介素-13受體a1抗體 英文縮寫(xiě)： IL-13Ra1

免疫相關(guān)鳥(niǎo)苷三磷酸酶基因抗體 英文縮寫(xiě)： IRGM

白細(xì)胞介素-13受體a2抗體 英文縮寫(xiě)： IL-13Ra2

嗜酸粒細(xì)胞趨化蛋白CCL1抗體 英文縮寫(xiě)： I-309

磷酸化胰島素樣生長(zhǎng)因子1受體抗體 英文縮寫(xiě)： phospho-IGF1R (Tyr1161)

胰島素降解酶抗體 英文縮寫(xiě)： IDE

槍狀肝吸蟲(chóng)PCR檢測(cè)試劑盒說(shuō)明書(shū)白介素12抗體 英文縮寫(xiě)： IL-12

白介素4抗體 英文縮寫(xiě)： IL-4

胰島素樣生長(zhǎng)因子結(jié)合蛋白9抗體 英文縮寫(xiě)： IGFBP9