市面上銷(xiāo)售的ELISA試劑盒種類(lèi)繁多，不同指標(biāo)的檢測(cè)范圍及實(shí)驗(yàn)方法不盡相同，甚至相同指標(biāo)不同廠家的試劑盒實(shí)驗(yàn)方法都可能會(huì)不一樣。但基本原理都是一致的，是將可溶性的抗原或抗體吸附到(C8H8)n等固相載體上，進(jìn)行免疫反應(yīng)的定性和定量方法。ELISA試劑盒變質(zhì)是ELISA實(shí)驗(yàn)中比較常見(jiàn)的問(wèn)題，現(xiàn)總結(jié)影響ELISA試劑盒質(zhì)保因素：
1、方法學(xué)的影響
ELISA測(cè)定模式包括以下幾種：雙抗體夾心法、間接法、雙抗原夾心法、IgM抗體捕捉法、競(jìng)爭(zhēng)抑制法，其中競(jìng)爭(zhēng)抑制法(HBeAb,HBcAb等采用)因受操作時(shí)差所引起的bu公平競(jìng)爭(zhēng)等因素的影響，結(jié)果重復(fù)性較差，質(zhì)量較難控制。
2、試劑因素
不同批次的ELISA試劑在制作過(guò)程中很難保證質(zhì)量全一致，即使是通過(guò)批批檢的項(xiàng)目其檢測(cè)結(jié)果也存在差異，因此必須選擇和訂購(gòu)長(zhǎng)批號(hào)的試劑，并保證保存條件。嚴(yán)格執(zhí)行這標(biāo)準(zhǔn)可以避免因試劑批號(hào)改變而重新建立質(zhì)控體系及重新評(píng)估試劑的復(fù)雜過(guò)程，并且能夠保證結(jié)果的穩(wěn)定性；對(duì)于效期短、使用率低的試劑，應(yīng)當(dāng)小量分裝，每次使用則取分裝部分即可，避免反復(fù)凍融造成試劑的失效。
3、樣本因素
標(biāo)本干擾因素包括內(nèi)源性干擾因素和外源性干擾因素，者包括類(lèi)風(fēng)濕因子、補(bǔ)體、異嗜性抗體、自身抗體等，后者包括標(biāo)本溶血、標(biāo)本被細(xì)菌污染、標(biāo)本貯存時(shí)間過(guò)長(zhǎng)、標(biāo)本凝固不全、冷凍標(biāo)本的反復(fù)凍融等。
4、操作因素
ELISA操作步驟復(fù)雜，操作不當(dāng)將引起較大的誤差。加樣、溫育、洗滌、顯色、比色。
5、灰區(qū)的設(shè)置
通常情況下，ELISA定性實(shí)驗(yàn)以“陽(yáng)性"和“陰性"來(lái)報(bào)告結(jié)果，兩者間有yi條分界線被稱(chēng)為“陽(yáng)性判斷值"(cut-off value，CO值)，這是定性免疫測(cè)定結(jié)果報(bào)告的依據(jù)。
6、標(biāo)本復(fù)查
ELISA手工檢測(cè)過(guò)程復(fù)雜，影響因素較多，即使室內(nèi)質(zhì)控在控，也可能因孔間差異而造成結(jié)果的差異，因此加大復(fù)查力度是保證結(jié)果準(zhǔn)確性的可靠方法，比如對(duì)HBsAg、HBeAg、HCV-Ab、HIV-Ab、TP-Ab等項(xiàng)目的可疑、弱陽(yáng)性標(biāo)本及少見(jiàn)模式的檢測(cè)結(jié)果進(jìn)行復(fù)查。
7、常表示結(jié)果的常用方法
a.定性測(cè)定。
b.半定量測(cè)定 結(jié)果yi般以滴度表示。
c.定量測(cè)定 即用已知量的標(biāo)準(zhǔn)品作一系列稀釋后進(jìn)行ELISA測(cè)定，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，結(jié)果以量或單位表示。
021-57763112
86-021-57690166
